In salmonids, hybrids derived from three -species or subspecies may be new breeding resources because hybrids between two salmonid species have been observed to reach maturity. However, the characteristics of three -species or -subspecies hybrid are unknown. Thus, we produced four families of three -subspecies F₂ hybrids by artificially crossbreeding F₁ hybrids (amago salmon (Oncorhynchus masou ishikawae) × biwa salmon (Oncorhynchus masou subsp.)) and F₁ hybrids (amago salmon × masu salmon (Oncorhynchus masou masou)). We bred the three -subspecies F₂ hybrids in fresh water for two years and we investigated their survival, growth, and fertility. The survival rates at hatching and from 5 to 12 months after fertilization were from 84.1 to 95.1% and from 97.2 to 98.8%, respectively, for four families of the three -subspecies F₂ hybrids. The body weights and body lengths 12 months after fertilization were from 214.8 to 248.2 g and from 23.4 to 24.1 cm, respectively, for four families of the three -subspecies F₂ hybrids. The percentage of mature individuals 24 months after fertilization were from 97.6 to 100.0% for four families of the three -subspecies F₂ hybrids. Furthermore, we produced three -subspecies F₃ hybrids by crossing four families of the three -subspecies F₂ hybrid female and male with more than about 1.5 kg or 1.0 kg body weight, respectively. These results indicate three -subspecies hybrids will be useful as new salmonid breeding resources.

アマゴとビワマスの F₁ 及びアマゴとサクラマスの F₁ の雌と雄を交配して、理論上アマゴとビワマス及びサクラマスのゲノムの一部を有する3亜種間雑種 F₂ を4家系作出し、生残性、成長、成熟を調査した。3亜種間雑種 F₂ の孵化率や受精後5ヶ月から12ヶ月までの生残性はアマゴと同等であった。また、受精後12ヶ月の平均体重は214.8～248.2 g、平均体長は23.4～24.1 cm であった。受精後12ヶ月に早熟個体と体重約200 g 以下の個体、受精後約18ヶ月に体重約500 g 以下の個体を除去したところ、生残した個体の受精後約24ヶ月の平均体重は1,442.6～1,720.5 g、平均体長は41.9～43.2 cm で、体重 2 kg 以上の個体も見られた。97.7～100.0%の個体が受精後約24ヶ月で成熟し、3亜種間雑種 F₃ を作出できた。以上から、3亜種間雑種 F₂ の生残性や成長及び妊性に問題はなく、新しい国産養殖用サケ科魚類として利用できる可能性があると考えられた。

本研究の材料に使用したアマゴ、ビワマス及びサクラマスの由来については、詳細不明であるが、アマゴは岐阜県、奈良県及び三重県の複数の産地のアマゴを複数世代にわたり交配し、増養殖研究所（当時）玉城庁舎で継代飼育した個体を用いた。ビワマスは琵琶湖産で、玉城庁舎で継代飼育した個体を使用した。サクラマスは北海道の尻別川由来で、中央水産研究所（当時）日光庁舎で継代飼育し、発眼卵を輸送して増養殖研究所（当時）玉城庁舎で飼育した個体を使用した。

本研究ではアマゴを A、ビワマスを B、サクラマスを C とし、アマゴ（A）雌×ビワマス（B）雄の交配で作出した2亜種間雑種 F₁ を AB、アマゴ（A）雌×サクラマス（C）雄の交配で作出した2亜種間雑種 F₁ を AC のように表す。2015年に作出したアマゴ（2015年世代）雌11個体（平均体重286.7 g、平均体長24.4 cm）と雄34個体（平均体重303.1 g、平均体長26.7 cm）、ビワマス（2015年世代）雌12個体（平均体重282.0 g、平均体長25.7 cm）と雄5個体（平均体重199.8 g、平均体長23.8 cm）、サクラマス（2014年世代）雄2個体（平均体重715.5 g、平均体長36.3 cm）を親魚に用いた。2017年10月25日及び11月1日に、アマゴ雌とビワマス雄の2亜種間雑種 F₁（AB）、ビワマス雌とアマゴ雄の2亜種間雑種 F₁（BA）、アマゴ雌とサクラマス雄の2亜種間雑種 F₁（AC）を作出した（Fig. 1）。また、3亜種間雑種 F₂ と生残、成長および成熟を比較するために必要なアマゴ（2019年世代）の親を確保するため、2015年に作出したアマゴ（2015年世代）雌30個体（平均体重389.0 g、平均体長26.6 cm）の卵と上記雄34個体を用いてアマゴ（2017年世代）を作出した。なお、親魚の死亡によりサクラマス雌を用いた交配は実施できなかった。

Fig. 1. Generation scheme for four families of three-subspecies F₂ hybrids among amago salmon (Oncorhynchus masou ishikawae) abbreviated as A, biwa salmon (Oncorhynchus masou subsp.) abbreviated as B, and masu salmon (Oncorhynchus masou. masou) abbreviated as C.

本研究では、3亜種間雑種 F₂ は2亜種間雑種 F₁ の BA 雌と BC 雄との交配によって作出したものは BABC のように表した。2019年10月23日に各2亜種間雑種 F₁ の大型で成熟した雌と雄から得た配偶子を用いて人工授精し、3亜種間雑種 F₂ を4家系作出した。家系1では2亜種間雑種F₁（BA）雌10個体（平均体重1,281.7 g、平均体長39.7 cm）と2亜種間雑種 F₁（AC）雄10個体（平均体重1,115.0 g、平均体長40.7 cm）の配偶子を用いて人工授精し、3亜種間雑種 F₂（BAAC）を作出した（Fig. 1）。家系2では2亜種間雑種 F₁（AB）雌10個体（平均体重1,213.5 g、平均体長39.5 cm）と上記2亜種間雑種 F₁（AC）雄10個体の配偶子を用いて人工授精し、3亜種間雑種 F₂（ABAC）を作出した（Fig. 1）。家系3では2亜種間雑種 F₁（AC）雌10個体（平均体重1,343.2 g、平均体長40.7 cm）と2亜種間雑種 F₁（BA）雄10個体（平均体重980.9 g、平均体長38.0 cm）の配偶子を用いて人工授精し、3亜種間雑種 F₂（ACBA）を作出した（Fig. 1）。家系4では上記2亜種間雑種 F₁（AC）雌10個体と2亜種間雑種 F₁（AB）雄8個体（平均体重829.5 g、平均体長35.3 cm）の配偶子を用いて人工授精し、3亜種間雑種 F₂（ACAB）を作出した（Fig. 1）。アマゴ（2019年世代）は2019年10月24日にアマゴ（2017年世代）の大型個体を選抜し、雌31個体（平均体重932.4 g、平均体長35.8 cm）と雄31個体（平均体重814.9 g、平均体長35.6 cm）の配偶子を用いた人工授精により作出した。また、2019年10月17日と30日においても、それぞれ雌20個体と雄 3 個体、雌雄各14個体を用いた人工授精によりアマゴ（2019年世代）を作出した。

受精卵は屋内の孵化槽内に設置した網カゴ（16 cm×24.5 cm×10.5 cm または30 cm×24.5 cm×10.5 cm）に収容し、水温約14～16℃で培養した。浮上した稚魚期以降は、毎日手蒔きによる飽食給餌を行った。3亜種間雑種 F₂ は孵化後約1ヵ月の稚魚を網カゴから屋内の200 cm 水槽に移した。アマゴ（2019年世代）については、孵化後約1ヵ月に大型の稚魚を約800個体選抜して網カゴから屋内の60 cm 水槽4個に移し、1水槽あたり約200個体として飼育を継続した。飼育期間中は週5～7日で自動給餌器と手蒔きによる飽食給餌を行った。孵化後約5ヵ月である翌年の3月末に、屋内の200 cm 水槽及び60 cm 水槽で飼育した3亜種間雑種 F₂ 及びアマゴ（2019年世代）を屋外のコンクリート飼育池（9.9 m×2.4 m×水深約1.0 m、約24 t）に移動した。3亜種間雑種 F₂ は生残した個体全てを家系ごとに4個の上記屋外飼育池で飼育を開始し、アマゴ（2019年世代）は大型の約400個体を選抜・混合し、ほぼ同数の2群に分けて2個の上記屋外飼育池で飼育を開始した。飼育期間中は週4～5日で手蒔きによる飽食給餌を行った。なお、2020年5月～2021年4月における上記屋外飼育池の月別平均水温は14.0～19.3℃であった。

3亜種間雑種 F₂ 及びアマゴ（2019年世代）は受精してから約12ヶ月が経過した2020年10月に、体重と体長を測定するとともに、体色と吻部の形状から第二次性徴を目視で確認し、腹部を圧迫して排卵、排精を確認して成熟雌と雄を判断した。飼育施設の規模の制限から全ての個体を継続して飼育できないため、選抜により一部の個体を残し、それ以外は殺処分した。将来的な養殖利用も想定し、サツキマス（アマゴ）では受精後2年目の冬期 4ヶ月の海面飼育で体重が約5倍になること、海面飼育後の出荷サイズは 1 kg 以上であること、早熟個体は海水馴致が困難であること、を考慮して選抜することにした。そこで、体色が銀白色で性別不明の個体のうち、体重が約200 g 以上の個体を選抜して継続飼育した。さらに、受精後2年目の冬期の成長不良個体を除去するため、2021年4月に体重500 g 以上の個体を選抜した。受精してから約24ヶ月が経過した2021年10月21～28日に、各個体の体長と体重を測定した。また、体色と吻部の形状から第二次性徴を目視で確認するとともに、腹部を圧迫して排卵、排精を確認して成熟雌と雄を判断した。

3亜種間雑種 F₃ が得られるか確認するため、2021年10月29日に3亜種間雑種 F₂ を交配した（Fig. 2）。なお、3亜種間雑種 F₃ のゲノム組成が家系間で等しくなり、遺伝的多様性も高くなると予想される組み合わせで3亜種間雑種 F₂ を交配した。この3亜種間雑種 F₃ は、理論上アマゴ雌由来のゲノムを3/8、アマゴ雄由来のゲノムを1/8、ビワマス雌由来のゲノムを1/8、ビワマス雄由来のゲノムを1/8、サクラマス雄由来のゲノムを1/4有する。3亜種間雑種 F₃ は4家系作出した。3亜種間雑種 F₃ の家系1は3亜種間雑種 F₂ 家系2（ABAC）雌10個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雌5個体、3亜種間雑種 F₂ 家系1（BAAC）雄 1 個体と3亜種間雑種 F₂ 家系3（ACBA）雄9個体の配偶子を用いて人工授精した受精卵と、3亜種間雑種 F₂ 家系 3（ACBA）雌6個体、3亜種間雑種 F₂ 家系 2（ABAC）雄2個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雄8個体の配偶子を用いて人工授精した受精卵を混合して作出した（Fig. 2a）。3亜種間雑種 F₃ の家系2は3亜種間雑種 F₂ 家系2（ABAC）雌2個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雌 4 個体、亜種間雑種 F₂ 家系3（ACBA）雄2個体の配偶子を用いて人工授精した受精卵と、亜種間雑種 F₂ 家系3（ACBA）雌 2 個体、3亜種間雑種 F₂ 家系2（ABAC）雄 1 個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雄 1 個体の配偶子を用いて人工授精した受精卵を混合して作出した（Fig. 2b）。3亜種間雑種 F₃ の家系3は3亜種間雑種 F₂ 家系1（BAAC）雌10個体、3亜種間雑種 F₂ 家系2（ABAC）雄2個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雄8個体の配偶子を用いた人工授精により作出した（Fig. 2c）。3亜種間雑種 F₃ の家系4は3亜種間雑種 F₂ 家系1（BAAC）雌2個体、3亜種間雑種 F₂ 家系2（ABAC）雄 1 個体と3亜種間雑種 F₂ 家系4（ACAB）雄 1 個体の配偶子を用いた人工授精により作出した（Fig. 2d）。アマゴ（2021年世代）は、2021年10月28日に雌21個体と雄15個体の配偶子を用いた人工授精と、雌 4 個体と雄 4 個体の配偶子を用いた人工授精により作出した。また、2021年10月21日においても、雌10個体と雄 6 個体を用いた人工授精によりアマゴ（2021年世代）を作出した。各受精卵は屋内の孵化槽内に設置した網カゴに収容し、水温約14～16℃で培養した。

Fig. 2. Generation scheme for four families of three-subspecies F₃ hybrids among amago salmon (Oncorhynchus masou ishikawae) abbreviated as A, biwa salmon (Oncorhynchus masou subsp.) abbreviated as B, and masu salmon (Oncorhynchus masou. masou) abbreviated as C. The numbers in parentheses are those of individuals used for crossbreeding.

3亜種間雑種 F₂ の家系1～4の孵化率は、それぞれ95.1%、84.1%、85.3%、87.1%であった（Table 1）。また、アマゴ（2019年世代）の3交配区の孵化率は、それぞれ81.8%、86.1%、91.3%であった（Table 1）。一方、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4における屋外飼育池で飼育した受精後5ヶ月～12ヶ月の生残率は、それぞれ98.8%、97.3%、98.5%、97.2%であった（Table 2）。また、アマゴ（2019年世代）では98.2%であった（Table 2）。

受精後約12ヶ月の平均体重と平均体長を調査したところ、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4はそれぞれ214.8 g と23.9 cm、217.9 g と23.7 cm、222.9 g と23.4 cm、248.2 gと24.1 cm であった（Table 2）。また、アマゴ（2019年世代）の平均体重は286.0 g で平均体長は25.6 cm であった（Table 2）。第二次性徴や排卵、排精の確認から成熟した雌と雄を判断したところ、受精後12ヶ月で成熟した、いわゆる早熟雌は3亜種間雑種 F₂ の家系1で2個体、アマゴ（2019年世代）で6個体見られた（Table 2）。一方、受精後12ヶ月で成熟した、いわゆる早熟雄は3亜種間雑種 F₂ の家系1～4でそれぞれ132個体、118個体、105個体、132個体であった（Table 2）。また、アマゴ（2019年世代）も116個体の早熟雄が見られた（Table 2）。

性別不明で体重が約200 g 以上の個体を選抜後、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4のそれぞれ70個体、77個体、116個体、131個体を、アマゴ（2019年世代）の134個体を引き続き飼育した。なお、選抜した個体の平均体重と平均体長は、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4において、それぞれ288.4 g と26.1 cm、290.7 g と26.7 cm、269.5 g と26.2 cm、283.7 g と26.4 cm であった（Table 3）。また、同様に選抜したアマゴ（2019年世代）の平均体重は290.6 g で平均体長は26.6 cm であった（Table 3）。

受精後約18ヶ月において体重500 g 以上の個体をさらに選抜したところ、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4のそれぞれ56個体、65個体、98個体、92個体、アマゴ（2019年世代）の123個体を引き続き飼育することになった（Table 3）。なお、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4における選抜個体の平均体重と平均体長は、それぞれ910.8 g と35.1 cm、858.0 g と34.5 cm、833.6 g と33.9 cm、776.3 g と32.9 cm であった（Table 3）。また、同様に選抜したアマゴ（2019年世代）の平均体重は908.6 g で平均体長は34.3 cm であった（Table 3）。

受精後約24ヶ月で飼育を終了した。この時点における生残個体数は3亜種間雑種 F₂ の家系1～4がそれぞれ49個体、60個体、86個体、85個体で、アマゴ（2019年世代）は97個体であった。また、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4における生残個体の平均体重と平均体長は、それぞれ1,720.5 g と43.2 cm、1,552.6 g と42.8 cm、1,518.9 g と42.5 cm、1,442.6 g と41.9 cm で、アマゴ（2019年世代）は1,627.2 g と42.3 cm であった（Table 4）。大型の個体も見られ、3亜種間雑種 F₂ の家系1では体重 2 kg 以上の雌9個体（孵化個体の1.9%）、1.5 kg 以上 2 kg 未満の雌25個体と雄 1 個体（孵化個体の5.3%）が確認された。同様に3亜種間雑種 F₂ の家系2では体重 2 kg 以上の雌7個体（孵化個体の1.6%）、1.5 kg 以上 2 kg 未満の雌26個体と雄2個体（孵化個体の6.5%）、3亜種間雑種 F₂ の家系3では体重 2 kg 以上の雌2個体と雄8個体及び性別不明1個体（孵化個体の2.4%）、1.5 kg 以上 2 kg 未満の雌20個体と雄5個体及び性別不明1個体（孵化個体の5.6%）、3亜種間雑種 F₂ の家系4では体重 2 kg 以上の雌 4 個体（孵化個体の0.9%）、1.5 kg 以上 2 kg 未満の雌25個体と雄 4 個体（孵化個体の6.5%）が確認された。また、アマゴ（2019年世代）では体重 2 kg 以上の雌7個体と 雄7個体（孵化個体の0.4%）、1.5 kg 以上 2 kg 未満の雌38個体と雄12個体（孵化個体の1.5%）が確認された。

第二次性徴や排卵、排精を確認したところ、ほとんどの個体が成熟しており（Fig. 3）、未成熟個体は3亜種間雑種 F₂ の家系1が1個体と3亜種間雑種 F₂ の家系3と4で各2個体のみであった（Table 4）。3亜種間雑種 F₂ の家系1～4における成熟個体の割合は、それぞれ98.0%、100.0%、97.7%、97.6%で、アマゴ（2019年世代）は100.0%であった（Table 4）。なお、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4における雌と雄の個体数は、それぞれ47個体と1個体、56個体と4個体、64個体と20個体、73個体と10個体で、アマゴ（2019年世代）は74個体と23個体であった（Table 4）。

Fig. 3. Secondary sexual characteristics of males and females of four families of three-subspecies F₂ hybrids among amago salmon (Oncorhynchus masou ishikawae), biwa salmon (Oncorhynchus masou subsp.), and masu salmon (Oncorhynchus masou. masou).

a: Female of Family 1 (Body Weight, 2,500 g, Body Length, 46.8 cm), b: Male of Family 1 (BW, 1,754 g, BL, 45.6 cm), c: Female of Family 2 (BW, 2,002 g, BL, 47.0 cm), d: Male of Family 2 (BW, 1,660 g, BL, 46.4 cm), e: Female of Family 3 (BW, 2,104 g, BL, 47.6 cm), f: Male of Family 3 (BW, 2,996 g, BL, 50.0 cm), g: Female of Family 4 (BW, 2,420 g, BL, 50.6 cm), h: Male of Family 4 (BW, 1,682 g, BL, 46.4 cm).

3亜種間雑種 F₂ から3亜種間雑種 F₃ を4家系作出した（Table 5）。3亜種間雑種 F₃ の家系1と3は、遺伝的多様性を考慮して次世代を作出するため、大型の雌と雄を10個体以上用いて交配した。また、3亜種間雑種 F₃ の家系2と4は、大型で鰭の形態が正常と判断され、朱点などの模様が明瞭な雌と雄を選抜して交配した。3亜種間雑種 F₃ の家系1～4を作出する交配に用いた2亜種間雑種 F₂ の雌の平均体重と平均体長は、それぞれ1,827.1 gと45.2 cm、2,222.3 g と47.5 cm、2,139.7 g と46.2 cm、2,345.0 g と45.9 cm で、雄の平均体重と平均体長は、それぞれ1,622.0 g と44.1 cm、2,151.0 g と46.7 cm、1,446.4 g と42.5 cm、1,838.0 g と44.5 cm であった。アマゴ（2021年世代）は、遺伝的多様性を考慮し、大型の雌21個体と雄15個体を用いて交配するとともに、大型の雌10個体と雄 6 個体を用いて交配し作出した（Table 5）。また、大型で鰭の形態が正常と判断され、朱点などの模様が明瞭な雌 4 個体と雄 4 個体を選抜して交配し、アマゴ（2021年世代）を作出した（Table 5）。アマゴ（2021年世代）を作出する上記3交配に用いた雌の平均体重と平均体長は、それぞれ1,729.6 g と43.2 cm、1,824.6 g と44.3 cm、2,243.3 g と47.6 cm で、雄の平均体重と平均体長は、それぞれ1,798.9 g と44.3 cm、2,095.7 g と46.2 cm、2,369.5 g と47.4 cm であった。3亜種間雑種 F₃ の家系1～4の孵化率は、それぞれ66.8%、57.4%、51.9%、45.0%であった（Table 5）。また、アマゴ（2021年世代）の孵化率は、それぞれ57.4%、78.4%、88.2%であった（Table 5）。

3亜種間雑種 F₂ の家系1～4の孵化率には大きな違いは認められず、家系間に差はほとんど無いと考えられた。また、アマゴ（2019年世代）の孵化率とも差が無いため、各2亜種間雑種 F₁ の卵と精子の受精能や、3亜種間雑種 F₂ の初期発生における生残性はアマゴと、それぞれ同様であったと考えられた。なお、孵化してから受精後5ヶ月までの屋内飼育については、飼育水槽の大きさ等の飼育環境が3亜種間雑種 F₂ とアマゴ（2019年世代）間で異なることや、飼育水槽の制限からアマゴ（2019年世代）は大きさで選別して小型の個体を除去し飼育数を減らしたため、3亜種間雑種 F₂ とアマゴ（2019年世代）の生残性を比較することはできなかった。

3亜種間雑種 F₂ の屋外飼育池で飼育した受精後 5ヶ月～12ヶ月の生残性は、アマゴと差が無いと考えられた。アマゴ雌×サクラマス雄の2亜種間雑種 F₁ の雌雄を交配して得た次世代（F₂）は、孵化率はサクラマスや上記2亜種間雑種 F₁ と大差なかったが、1年間飼育した結果ではサクラマスや上記2亜種間雑種 F₁ よりも生残性が低かったという報告がある ⁸⁾。この理由として、2亜種間雑種 F₁ 同士を交配した次世代（F₂）では、片方の親魚種の形質が分離してくるからではないかと考えられている ⁸⁾。これに対し、3亜種間雑種 F₂ の家系1～4がアマゴと同様の生残性を示したのは、アマゴ×ビワマスの2亜種間雑種 F₁ とアマゴ×サクラマスの2亜種間雑種 F₁ を交配したことにより、各相同染色体の由来が2亜種となる確率が、理論上では3/4（アマゴとビワマスの組み合わせで1/4、アマゴとサクラマスの組み合わせで1/4、ビワマスとサクラマスの組み合わせで1/4）となり、同亜種となる確率が1/4（アマゴとアマゴの組み合わせで1/4）となったことから、ホモになる遺伝子座が少なく、片方の親魚亜種の形質が分離する確率が減ったことも理由として考えられた。

3亜種間雑種 F₃ では、理論上アマゴ雌由来のゲノムを3/8、アマゴ雄由来のゲノムを1/8、ビワマス雌由来のゲノムを1/8、ビワマス雄由来のゲノムを1/8、サクラマス雄由来のゲノムを1/4有する。この場合、各相同染色体の由来が2亜種となる確率が、理論上では5/8（アマゴとビワマスの組み合わせが1/4、アマゴとサクラマスの組み合わせが1/4、ビワマスとサクラマスの組み合わせが1/8）となり、同亜種となる確率が3/8（アマゴとアマゴの組み合わせが1/4、ビワマスとビワマスの組み合わせが1/16、サクラマスとサクラマスの組み合わせが1/16）となる。このため、3亜種間雑種 F₃ は3亜種間雑種 F₂ よりも各相同染色体の由来が同亜種となる確率が理論上1/8高くなる。3亜種間雑種 F₃ の孵化率が、アマゴ（2021年世代）よりも低い傾向にあったのは、各相同染色体の由来が同亜種となる確率が3亜種間雑種 F₂ よりも1/8高くなることも影響した可能性があると考えられた。しかし、詳細は不明であるため、3亜種間雑種 F₂ のゲノム情報やこれとアマゴの戻し交配の結果等を得た上で改めて考察する必要がある。

3亜種間雑種 F₂ の受精後約12ヶ月における成長は、家系4が他の家系よりも少し成長が良かった傾向にあると考えられた。3亜種間雑種 F₂ とアマゴ（2019年世代）では、孵化してから受精後 5ヶ月までの飼育水槽の大きさ等の飼育環境が異なるため、成長を比較できない。しかし、アマゴ（2019年世代）は孵化してから受精後 5ヶ月までに大きさで選別して小型の個体を除去することにより、飼育数を約1/8に減らしたことを考慮すると、3亜種間雑種 F₂ はアマゴ（2019年世代）よりも受精後約12ヶ月までの成長が良かった可能性がある。

3亜種間雑種 F₂ の受精後約12ヶ月から受精後約18ヶ月の秋から翌年春までの成長では、家系4は他の家系よりも少し悪かった傾向にあった。しかし、受精後約12ヶ月からの飼育個体数が家系間で異なることから、飼育密度の影響も考えられた。また、3亜種間雑種 F₂ はアマゴ（2019年世代）と同様の成長を示したと考えられた。

3亜種間雑種 F₂ の受精後約18ヶ月から受精後24ヶ月の春から秋までの成長では、家系1が他の家系よりも成長が早い傾向があり、家系4が他の家系よりも成長が遅い傾向が見られた。しかし、3亜種間雑種 F₂ の個体数が、家系間で異なることから、飼育密度の影響も考えられた。また、3亜種間雑種 F₂ はアマゴ（2019年世代）と同様の成長を示したと考えられた。3亜種間雑種 F₂ とアマゴ（2019年世代）ともに、受精後18ヶ月から24ヶ月の成長は平均体重で2倍を超えることはなかった。これは、夏至以降に死亡した個体の生殖腺が発達していたことから、成熟により生殖腺形成にエネルギーが利用されたことや、成熟との関連は不明であるが摂餌量の低下が見られたことから、受精後2年目の夏期の成長が悪かったためと推測された。

孵化仔魚のうち受精後24ヶ月で体重1.5 kg 以上になった個体の割合は、3亜種間雑種 F₂ の家系間で差はほとんど無く、アマゴ（2019年世代）よりも割合が高い傾向にあると考えられた。3亜種間雑種 F₂ を作出する交配に用いた2亜種間雑種 F₁ では受精後24ヶ月で体重1.5 kg 以上であった親魚は3個体（アマゴ雌×サクラマス雄（AC）雌2個体（1,604 g、1,512 g）、ビワマス雌×アマゴ雄（BA）雌1個体（1,528 g））であった。一方、交配に用いたアマゴ（2017年世代）では受精後24ヶ月で体重1.5 kg 以上であった親魚は無く、最重量の雌で体重1,410 g であった。また、2亜種間雑種 F₁ を作出した親魚である本3亜種のうち、アマゴ（2015年世代）とビワマスは受精後24ヶ月で体重0.5 kg 未満の個体を交配に使用しており、サクラマスは受精後36ヶ月で体重0.8 kg 未満の個体を交配に使用していた。アマゴ（2017年世代）を作出したアマゴ（2015年世代）の親魚は受精後24ヶ月で体重0.6 kg 未満の個体であった。なお、飼育条件は各世代でほぼ同様と考えられた。これらから、2亜種間雑種化さらに3亜種間雑種化したことや大型個体を親魚に用いたことにより、3亜種間雑種 F₂ やアマゴ（2019年世代）では受精後24ヶ月の淡水飼育で体重1.5 kg 以上になる大型個体が出現した可能性があると考えられた。また、3亜種間雑種 F₂ ではアマゴ（2019年世代）よりも受精後24ヶ月で体重1.5 kg 以上になる個体の割合が高い傾向にあったのは、3亜種間雑種 F₂ の作出に用いた2亜種間雑種 F₁（BA 及び AB）雌と（AC）雄が、アマゴ（2019年世代）の作出に用いたアマゴ（2017年世代）よりも大型であったことも影響した可能性がある。このため、本3亜種のより大型の個体を親魚に用いることで、2亜種間雑種 F₁ や3亜種間雑種 F₂ がより大型になるか、検討する必要がある。

受精後24ヶ月における3亜種間雑種 F₂ の成熟は、家系間の差はほとんど無く、アマゴ（2019年世代）の成熟と同様であったと考えられた。なお、3亜種間雑種 F₂ とアマゴ（2019年世代）ともに雄の割合が雌よりも低いが、これは受精後12ヶ月に早熟雄を除去したためと推測された。

アマゴでは放流等を通じてサクラマスやビワマスとの交雑が確認されている ^19-22)。このため、妊性を有する3亜種間雑種 F₂ も自然水域でアマゴやビワマス及びサクラマスと交雑する可能性がある。さらに、アマゴはイワナとも属間交雑することが報告されている ^10),23-25)ため、3亜種間雑種 F₂ もイワナと属間交雑する可能性がある。自然水域における生態系への影響を考える上では、人為的に作出した3亜種間雑種 F₂ とアマゴやイワナといった在来種との交雑後代について特性を調べることが重要である。そこで、3亜種間雑種 F₂ と親魚である本3亜種との戻し交配やイワナ等の他のサケ科魚類との交雑を行い、後代の生存性や成熟を調べる必要がある。また、上述の通り3亜種間雑種 F₃ が作出できたことから、これの成長や生残性及び妊性を調査し、3亜種間雑種 F₄ 以降の世代が得られるか検討するとともに、妊性がある場合は上記戻し交配やサケ科魚類との交雑により、後代が得られるか確認する必要がある。

このような人為的に作出した魚類の交雑を通じた生態系影響の軽減には、不妊化が有効であると考えられる。よって、3亜種間雑種 F₂ においても不妊化に効果的な3倍体魚の作出方法の開発^26-30)や、放射線照射を利用した不妊化手法の開発 ^31-34)等に関する研究も必要になると考えられる。交雑の有無を迅速に把握するには、ゲノム DNA を利用した種判別や亜種判別用の DNA マーカーが有効である^20,35-41)。しかし、3亜種間雑種 F₂ はアマゴ由来のゲノムを1/2，ビワマス由来のゲノムを1/4，サクラマス由来のゲノムを1/4の割合で有し、個体間で各相同染色体の由来が異なると予想される。すなわち、同じ相同染色体でも、個体によってアマゴ由来の染色体とビワマス由来の染色体の組み合わせ、アマゴ由来の染色体とサクラマス由来の染色体の組み合わせ、ビワマス由来の染色体とサクラマス由来の染色体の組み合わせ、アマゴ由来の染色体とアマゴ由来の染色体の組み合わせの4通りのうちのどれかになる。さらに2亜種間雑種 F₁ の減数分裂時に亜種間由来の染色体間で組換えが生じる可能性を考慮すると、特定の遺伝子の塩基配列を利用した種判別や亜種判別用の DNA マーカーでは、3亜種間雑種 F₂ やこれ以降の世代を親魚種である上記3亜種や2亜種間雑種 F₁ と判別するのは困難である。よって、多数の遺伝子座で上記3亜種を判別できる DNA マーカーや、アマゴ、サクラマス、ビワマスのゲノム情報を蓄積してこれとの塩基配列比較により2亜種間雑種 F₁や3亜種間雑種 F₂ 以降の世代を上記3亜種から判別できる手法の開発が必要になると考えられる。

アマゴでは早熟雄やパーの雌を親魚に用いると次世代の早熟雄の出現率が上昇し、雄親魚や雌親魚にスモルトを用いると次世代のスモルトの出現率が上昇することが知られている^42-44)。また、外観を選抜指標としてスモルト同士を交配することによって、雌雄ともスモルト化率の高い系統が作られている ^42,45)。さらに、系群間や個体間で成熟と非成熟に分化する魚体の大きさが異なることも報告されている ^42,46)。サクラマスにおいても、継代飼育により早熟雄の出現率が低くなり、スモルトの出現率が高くなっている飼育群があることや、早熟雄を親魚に用いると次世代の早熟雄の出現率が上昇すること、春季の成長率および体サイズがサクラマスの0+のスモルト化に影響を及ぼすことが知られている ^47-49) 。3亜種間雑種 F₃ は、受精後約12ヶ月では体色が銀白色で性別不明であったが、受精後約24ヶ月では成熟した3亜種間雑種 F₂ の雌雄を交配して作出した。このため、3亜種間雑種 F₃ は早熟個体の出現率が3亜種間雑種 F₂ よりも低くなる可能性が考えられた。アマゴ（2021年世代）も3亜種間雑種 F₂ と同様の成熟特性を示したアマゴ（2019年世代）の雌雄を交配して作出したため、早熟個体の出現率がアマゴ（2019年世代）よりも低くなる可能性がある。また、交配に用いた3亜種間雑種 F₂ やアマゴ（2019年世代）は、受精後約12ヶ月で体重が約200 g 以上、受精後約18ヶ月で体重が約500 g 以上であった個体であるため、受精後約18ヶ月までの成長が良い。これらから、受精後2年目の冬期における海面飼育に適した3亜種間雑種 F₃ やアマゴ（2021年世代）が得られる可能性もある。一方で、ビワマスのスモルトはアマゴのスモルトより海水適応能が低いとする報告がある ⁵⁰⁾ため、3亜種間雑種 F₂ やこれ以降の世代では海水適応能が弱いスモルトが一部出現する可能性がある。このため、受精後2年目の冬期に海面飼育する養殖に3亜種間雑種 F₂ やこれ以降の世代を利用する場合は、あらかじめスモルトの海水適応能を調査する必要があると考えられる。淡水飼育においても、上記受精後約12ヶ月及び約18ヶ月の体サイズに基づく選抜により、3亜種間雑種 F₃ やアマゴ（2021年世代）では受精後約24ヶ月で1.5 kg 以上になる個体が親世代と同様あるいはそれ以上の割合で出現する可能性がある。しかし、スモルト化率が高くなると予想されるため、大型のパー系統を作出したい場合は、アマゴで報告されている ^44,46)ように3亜種間雑種 F₂ やこれ以降の世代でも大型で雌のパー個体や大型の早熟雄を選別して交配に用いることが有効と考えられる。

本研究では4家系の3亜種間雑種 F₂ を作出したが、サクラマス雌を利用した3亜種間雑種 F₂ も作出できると考えられる。また、サクラマスとビワマスの2亜種間雑種 F₁ とサクラマスとアマゴの2亜種間雑種 F₁ を交配して、サクラマス由来のゲノムを1/2，ビワマス由来のゲノムを1/4，アマゴ由来のゲノムを1/4の割合で有する3亜種間雑種 F₂ や、ビワマスとアマゴの2亜種間雑種 F₁ とビワマスとサクラマスの2亜種間雑種 F₁ を交配して、ビワマス由来のゲノムを1/2，アマゴ由来のゲノムを1/4，サクラマス由来のゲノムを1/4の割合で有する3亜種間雑種 F₂ も作出できると考えられる。本研究ではミトコンドリア DNA の由来がアマゴであるかビワマスであるかを含めて異なる交配の組み合わせで4家系の3亜種間雑種 F₂ を作出したが、家系間で生残性や成長、妊性は同様であった。しかし、サケ科魚類の雑種は雌親魚種と雄親魚種の組み合わせが逆になると、雑種 F₁ や異質3倍体の生残性や成長および妊性が変わることある^2-8)ことから、本研究とは異なる交配の組み合わせで作出した3亜種間雑種 F₂ は、上記4家系の3亜種間雑種 F₂ とは異なる特性を示す可能性がある。このため、本研究で作出した3亜種間雑種 F₂ とは異なる交配の組み合わせで3亜種間雑種 F₂ を作出して特性を調査し、3亜種の優良形質を兼ね備えた新しい国産養殖用サケ科魚類（亜種間雑種）が得られるか確認することも必要である。

本研究結果から、アマゴとビワマス及びサクラマスの3亜種間雑種 F₂ は近交弱勢が見られず、生残性はアマゴと同等であり、受精してから24ヶ月の淡水飼育で体重 2 kg 以上の個体も得られたことから、新しい国産養殖用サケ科魚類として利用可能であると考えられた。また、3亜種間雑種 F₃ が得られたことから、これ以降の世代で3亜種間雑種 F₂ の特性を維持あるいは改良できれば、毎年交雑して3亜種間雑種 F₂ を作出する必要が無いため、継続的に利用しやすいと考えられた。この場合、3亜種間雑種 F₂ はアマゴとビワマス及びサクラマスの優良形質を兼ね備えた新しい国産養殖用サケ科魚類の作出に貢献する育種素材になる。さらに、3亜種間雑種 F₂ は親魚に用いた上記3亜種の特性を受け継ぐことや遺伝的多様性が高いと予想されることから、これをもとに淡水養殖や海面養殖及び陸上養殖での生産にそれぞれ適した養殖集団が開発できる可能性がある。また、アマゴやサクラマス等と戻し交配することで、養殖サケ科魚類における複数の新しい日本ブランドや地域ブランドの確立にも活用できると期待された。一方で、妊性のある3亜種間雑種は、在来のサケ科魚類と交雑する恐れがあるため、不妊化や逃亡を阻止する飼育施設での飼育など、利用においては生態系への影響に注意する必要がある。

本研究の実施にあたり貴重な助言、便宜を図って頂いた国立研究開発法人水産研究・教育機構増養殖研究所育種研究センター（当時）と同機構水産技術研究所育種部及び材料を提供頂いた同機構中央水産研究所日光庁舎（当時）の方々に深謝する。本研究は国立研究開発法人水産研究・教育機構の支援を受けた。

• 1)  編集部（2019）新規参入が相次ぐ海面トラウトとご当地サーモン全国マップ，「よくわかる！ジャパンサーモン養殖」．養殖ビジネス，2019年臨時増刊号，緑書房，東京，pp. 18-20.
• 2)   Suzuki,  R. and  Y.  Fukuda (1971) Survival potential of F₁ hybrids among salmonid fishes. Bulletin of Freshwater Fisheries Research Laboratory, 21: 69-83.
• 3)  荒井克俊（1989）8．異質倍数体，「水産増養殖と染色体操作」，鈴木亮編，水産学シリーズ，75，恒星社厚生閣，東京，pp. 82-94.
• 4)  荒井克俊・藤本貴史・山羽悦郎（2017）第10章　交雑と育種，「水産遺伝育種学」，中嶋正道・荒井克俊・岡本信明・谷口順彦編，東北大学出版会，仙台，pp. 171-186.
• 5)   Suzuki,  R. and  Y.  Fukuda (1972) Growth and survival of F₁ hybrids among salmonid fish. Bulletin of Freshwater Fisheries Research Laboratory, 21: 117-138.
• 6)   Suzuki,  R. and  Y.  Fukuda (1973) Appearance and numerical characters of F₁ hybrids among salmonid fishes. Bulletin of Freshwater Fisheries Research Laboratory, 23: 5-32.
• 7)   Suzuki,  R. and  Y.  Fukuda (1973) Sexual maturity of F₁ hybrids among salmonid fishes. Bulletin of Freshwater Fisheries Research Laboratory, 23: 57-74.
• 8)   Suzuki,  R. (1974) Inter-crossing and back-crossing of F₁ hybrids among salmonid fishes. Bulletin of Freshwater Fisheries Research Laboratory, 24: 11-31.
• 9)  松岡喜作（1974）改良種“タイガーマス”の作出と養殖．養殖，緑書房，東京，pp. 50-54．
• 10)  服部克也・本田是人・峯島史明（1989）ニジマス・アマゴ・イワナ間での異質三倍体魚の作出について．愛知県水産試験場業務報告，54-55．
• 11)  小原昌和・傳田郁夫（2008）染色体操作による異質3倍体品種「信州サーモン」の開発．水産育種，37: 61-66．
• 12)  網田健次郎（2010）ミニシンポジウム記録　水産技術者の業務と技術者倫理，地域特産に向けた「上沼美雪ます（ニジマス全雌異質三倍体）」の安全・安心．日本水産学会誌，76: 1109．
• 13)  三浦正之・岡崎　巧・大浜秀規（2017）サケ科魚類の新しい養殖対象種について「全雌異質三倍体ニジノスケの成長および成熟状況」．山梨県水産技術センター事業報告書，44: 1-12．
• 14)  真山　紘・木村清朗（2005）サクラマス・ヤマメ，「改訂版　日本の淡水魚」，川那部浩哉・水野信彦・細谷和海編，山と渓谷社，東京，pp. 156-168．
• 15)  中野　繁・田口茂雄・柴田勇治他（4共著者）（2005）サツキマス・アマゴ，「改訂版　日本の淡水魚」，川那部浩哉・水野信彦・細谷和海編，山と渓谷社，東京，pp. 169-179．
• 16)  古川哲夫（2005）ビワマス，「改訂版　日本の淡水魚」，川那部浩哉・水野信彦・細谷和海編，山と渓谷社，東京，pp. 180-183．
• 17)  茂木　博・本荘鉄夫・立川　瓦（1975）ヤマメとアマゴの交雑について－Ⅰ 交雑種 F₁ の形質．岐阜県水産試験場研究報告，20: 55-60．
• 18)  正岡哲治・名古屋博之・岡本裕之他（4共著者）（2021）遺伝子組換えアマゴとサクラマス，ビワマス，イワナとの人工交雑により作出した後代の生残性と妊性．水産育種，50: 1-10．
• 19)  田子泰彦（2002）サクラマス生息域である神通川へのサツキマスの出現．水産増殖，50: 137-142．
• 20)   Yamazaki,  Y.,  N.  Shimada and  Y.  Tago (2005) Detection of hybrids between masu salmon Oncorhynchus masou masou and amago salmon O. m. ishikawae occurred in the Jinzu River using a random amplified polymorphic DNA technique. Fisheries Science, 71: 320-326.
• 21)  Kuwahara, M., H. Takahashi, T. Kikko, et al. (5 co-authors) (2012) Introgression of Oncorhynchus masou subsp. (Biwa salmon) genome into lake-run O. m. ishikawae (Amago salmon) introduced into Lake Biwa, Japan. Ichthyological Research, 59: 195-201.
• 22)  北西　滋・向井貴彦・山本俊昭他（5共著者）（2017）サクラマス自然分布域におけるサツキマスによる遺伝的攪乱．日本水産学会誌，83: 400-402．
• 23)  服部克也（1991）イワナ（雌）とアマゴ（雄）の間での雑種に見られた形態的，生化学的特徴．水産増殖，39: 77-82．
• 24)  Sato, T., K. Watanabe, M. Arizono, et al. (6 co-authors) (2008) Intergeneric hybridization between sympatric Kirikuchi char and Red-spotted Masu salmon in a small Japanese mountain stream. North American Journal of Fisheries Management, 28: 547-556.
• 25)  向井孝彦・二村　凌・丹羽大樹他（8共著者）（2015）岐阜県揖斐川支流におけるイワナとアマゴの交雑個体の形態および遺伝的特徴．魚類学雑誌，62: 149-156．
• 26)   Benfey , T. J. and A. M.  Sutterlin  (1984) Growth and gonadal development in triploid landlocked Atlantic salmon (Salmo salar). Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 41: 1387-1392.
• 27)   Penman , D. I., D. O. F.  Skibinski  and J. A.  Beardmore  (1987) Survival, growth and maturity in triploid tilapia, pp. 277-288, in Selection, Hybridization and Genetic Engineering in Aquaculture Vol. II, eds. by K. Tiews, Heenemann, Berlin.
• 28)   Kim , D. S., J. Y.  Jo  and T. Y.  Lee  (1994) Induction of triploidy in mud loach (Misgurnus mizolepis) and its effect on gonad development and growth. Aquaculture, 120: 263-270.
• 29)   Piferrer,  F., T. J.  Benfey  and E. M.  Donaldson  (1994) Gonadal morphology of normal and sex-reversed triploid and gynogenetic diploid coho salmon (Oncorhynchus kisutch). Journal of Fish Biology, 45: 541-553.
• 30)   Gillet,  C.,  C.  Vauchez and  P.  Haffray (2001) Triploidy induced by pressure shock in Arctic charr (Salvelinus alpinus): growth, survival and maturation until the third year. Aquatic Living Resources, 14: 327-334.
• 31)   Egami,  N. and  Y.  Hyodo-Taguchi (1969) Hermaphroditic gonads produced in Oryzias latipes by X-radiation during embryonic stages. Copeia, 1969: 195-196.
• 32)  田代文男（1972）ニジマスの成熟に及ぼすγ 線の影響について．日本水産学会誌，38: 793-797．
• 33)  Nagoya, H., H. Okamoto, T. Masaoka, et al. (6 co-authors) (2008) Effects of X-ray irradiation on the maturation of amago salmon, Oncorhynchus masou ishikawae. Proceedings of the WFC 2008: 3B01.
• 34)  正岡哲治・名古屋博之・岡本裕之他（4共著者）（2019）X 線照射による遺伝子組換えアマゴの不妊化．水産育種，48: 117-123．
• 35)  Takasaki, N., S. Murata, M. Saitoh, et al. (6 co-authors) (1994) Species-specific amplification of tRNA-derived short interspersed repetitive elements (SINEs) by retroposition: A process of parasitization of entire genomes during the evolution of salmonids. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 91: 10153-10157.
• 36)  Carrera, E., T. García, A. Céspedes, et al. (8 co-authors) (2000) Identification of smoked Atlantic salmon (Salmo salar) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) using PCR-restriction fragment length polymorphism of the p53 gene. Journal of AOAC international, 83: 341-346.
• 37)  市村政樹・柳本　卓・小林敬典他（5共著者）（2011）北海道東部根室海峡周辺で採集された「サケマス」のDNA分析による交雑判定．日本水産学会誌，77: 834-844．
• 38)  Perrier, C., F. Grandjean, J. L. Gentil, et al. (5 co-authors) (2011) A species-specific microsatellite marker to discriminate European Atlantic salmon, brown trout, and their hybrids. Conservation Genetics Resources, 3: 131-133.
• 39)  Pritchard, V. L., J. Erkinaro, M. P. Kent, et al. (7 co-authors) (2016) Single nucleotide polymorphisms to discriminate different classes of hybrid between wild Atlantic salmon and aquaculture escapees. Evolutionary Applications, 9: 1017-1031.
• 40)  Masaoka, T., H. Oku, H. Nagoya, et al. (7 co-authors) (2019) Distinction of hybrid between Oncorhynchus masou ishikawae and Salvelinus leucomaenis using aromatase gene and 16S rRNA gene. DNA Testing, 11: 1-9.
• 41)   Beacham,  T. and C. G.  Wallace  (2020) Salmon species identification via direct DNA sequencing of single amplicons. Conservation Genetics Resources, 12: 285-291.
• 42)  後藤功一（1994）アマゴの育種に関する研究－I，河川残留型及び降海型アマゴの相分化における系統特性について．岐阜県水産試験場研究報告，39: 21-28．
• 43)  後藤功一（1995）アマゴの育種に関する研究－Ⅱ，河川残留型及び降海型アマゴの相分化における系統特性について-2．岐阜県水産試験場研究報告，40: 11-18．
• 44)  徳原哲也・桑田知宣（2005）アマゴの育種に関する研究－IX，早熟雄とスモルト雌が次世代の相分化に与える影響について．岐阜県淡水魚研究所研究報告，50: 7-11．
• 45)  徳原哲也・桑田知宣（2002）アマゴの育種に関する研究－VIII，12代スモルト選抜を行った魚の生物学的特性．岐阜県淡水魚研究所研究報告，47: 1-4．
• 46)   Kuwada,  T.,  Tokuhara  T.,  Shimizu  M, et al. (4 co-authors) (2016) Body size is the primary regulator affecting commencement of smolting in amago salmon Oncorhynchus masou ishikawae. Fisheries Science, 82: 59-71.
• 47)  小島　博・喜多正広（1984）池中継代飼育サクラマス零歳魚の銀毛化変態と早熟雄の出現．北海道立水産孵化場研究報告，39: 113-121．
• 48)  下田和孝（2001）サクラマスのジャックの分岐に関わる成長および雄親の生活型の影響．北海道立水産孵化場研究報告，55: 13-17．
• 49)  下田和孝（2002）春季の成長率および体サイズがサクラマス0+スモルト化に与える影響．北海道立水産孵化場研究報告，56: 97-105．
• 50)  藤岡康弘（1989）ビワマスとアマゴの発眼卵および稚魚の海水耐性．滋賀県水産試験研究報告，41: 10-13．